CRISPR/Cas(CRISPR-Associated)是一種由RNA指導Cas核酸酶對靶向基因進行特定DNA修飾。它是細菌和古細菌為應對噬菌體和質粒不斷攻擊而演化來的獲得性免疫防御機制。來自Streptococcus pyogenes的CRISPR/Cas9系統只需單個蛋白，應用廣泛。通過人工優化的具有引導作用的gRNA (guide RNA)引導核酸酶Cas9蛋白在與gRNA配對的靶位點處剪切雙鏈DNA，引起DNA雙鏈斷裂（DSB），進而利用生物體內非同源末端修復機制（NHEJ）或同源重組機制（HR）修復DNA，導致基因移碼突變、替換或刪除，在模板DNA引入的情況下還可以特異性插入目的片段。CRISPR/Cas9系統已經成功應用于植物、細菌、酵母、魚類及哺乳動物細胞的基因組編輯工具。

       相比較與以前常用的由質粒介導表達或者mRNA注射導入Cas9蛋白的方法，近年來的研究發現直接用Cas9蛋白與gRNA形成RNP復合體之后通過注射、轉染或電轉等方法導入細胞或胚胎內，可以更快的發生基因編輯，并能降低脫靶率和減少細胞毒性，是目前被廣泛認可的基因編輯手段。Sudgen提供的重組Cas9蛋白是高度純化的Streptococcus pyogenes野生型蛋白，C端帶有細胞核定位序列(NLS)幫助Cas9核酸酶進入細胞核進行基因編輯。Cas9蛋白也可用于體外剪切基因組DNA驗證gRNA的有效性，節省體內預實驗所需時間。

spCas9 重組蛋白

產品說明書SUDGEN授權書

產品簡介： 

· 野生型spCas9重組蛋白；

· C端帶有細胞核定位序列NLS；

· 無RNA酶污染；

· 純度95%左右；

· 高活性，可與2個或以上gRNA結合注射，切除大片段DNA；

· 可用于體外編輯、細胞內、小鼠、斑馬魚、果蠅胚胎等Cas9蛋白復合體注射；

· 適用于細胞轉染或電轉；

· 提供1 ug/ml和5 ug/ml兩種蛋白濃度保存于緩沖液中。

實驗數據：